對(duì)PCR擴(kuò)增試劑盒的一般建議及事項(xiàng)說(shuō)明

　　一般建議：

　　PCR擴(kuò)增試劑盒可很穩(wěn)定的擴(kuò)增出終長(zhǎng)度小于12 kb的片段（如基因組DNA）；當(dāng)擴(kuò)增片段終長(zhǎng)度在12-20 kb時(shí)（如基因組DNA），那么模板質(zhì)量，變性條件和恰當(dāng)?shù)膁NTP/Mg離子濃度等相關(guān)條件對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果非常關(guān)鍵；如果擴(kuò)增片段總長(zhǎng)度大于20kb，則操作條件需要進(jìn)一步優(yōu)化。

　　PCR擴(kuò)增試劑盒相關(guān)注意事項(xiàng)說(shuō)明：

　　1.對(duì)于長(zhǎng)片段擴(kuò)增，請(qǐng)使用薄壁PCR管。

　　2.變性時(shí)，盡可能縮短變性時(shí)間，降低變性溫度。

　　3.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。

　　4.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。

　　5.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。

　　6.PCR試劑配制應(yīng)使用高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。

　　7.試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。

　　8.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。

　　9.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。