RT-PCR試劑盒檢測RNA濃度和純度說明

更新時間：2024-03-14

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RT-PCR試劑盒適用于以RNA為模板合成一鏈cDNA的反轉錄，以及后續的PCR擴增實驗。本試劑盒選用優異的M-MLV RT酶，可以合成大于5kb的一鏈cDNA；反轉錄過程中的特異的RNase抑制劑可有效降低由于外源RNase污染而導致實驗失敗的風險。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于cDNA克隆及目的基因檢測等分子生物實驗。

RNA濃度和純度分析：

濃度計算：對于單鏈RNA，OD260＝1.0時，RNA濃度為40μg/ml，稀釋時OD260＝0.1時，其RNA濃度為4μg/ml。

純度分析：純凈的RNA樣品其OD260/OD280的比值應介于1.8-2.0。小于此比值說明有蛋白或苯酚污染，如果比值大于2.0，則可能被異硫氰酸胍污染；OD260/OD230比值應大于2.0，如果小于此比值說明有小分子及鹽類污染。

濃度測定：

使用RNA濃度測定儀，測定樣品A260和A280值。根據A260/A280比值，估測RNA質量。一般A260/A280比值在1.8-2.0之間，可以滿足實驗要求。在100μl RNA原液中取1μl稀釋至250μl（DEPC處理的水），測定樣品的A260和A280的值，按下列公式計算其濃度：

RNA原液濃度=A260×稀釋倍數×40（ng/μl）。

測定RNA濃度基本操作步驟：

1.取1μl RNA原液，放在0.5ml EP管中，加入249μl dd H2O，用移液槍反復混勻。

2.用dd H2O為空白對照，調節A260零點。

3.倒掉比色杯中的水，加入稀釋并混合均勻的RNA樣液，測定A260值。倒掉比色杯中的RNA樣液，用dd H2O沖洗比色杯，再調節A280零點。

4.倒掉比色杯中的水，加入稀釋并混合均勻的RNA樣液，測定A280值。計算A260/A280比值，比值≥1.8，滿足實驗要求。

5.RNA原液濃度=A260×稀釋倍數×40（ng/μl）。