對熒光-PCR法的熒光染料說明

更新時間：2021-08-13

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　　熒光-PCR法不同于其他PCR的地方在于PCR過程中利用熒光染料在光刺激下釋放的熒光能量的變化直接反映出PCR擴增產物量的變化，熒光信號變量與擴增產物變量成正比，并通過足夠靈敏的自動化儀器實現對熒光的采集和分析以達到對原始模板量定量的目的。

　　熒光基團通常各自擁有單一的光吸收峰。在光的刺激下，熒光基團吸收光的能量后通常以三種方式釋放出能量：

　　1.光能：許多熒光基團吸收光能后仍舊以光能形式釋放能量，并且發射光的峰值大于吸收峰。

　　2.熱能：某些熒光基團吸收光能后，能量轉換為熱量擴散到環境中。

　　3.轉移給臨近的分子：當臨近的分子滿足發生能量轉移的要求時，能量從熒光基團傳遞到臨近的分子。

　　當某個熒光基團的發射譜與另一熒光基團的吸收光譜發生重疊，且兩個基團距離足夠近時，能量可以從短波長（高能量）的熒光基團傳遞到長波長（低能量）的熒光基團，這個過程稱為熒光共振能量轉移(FRET)，實際相當于將短波長熒光基團釋放的熒光屏蔽。

　　熒光-PCR法區別于其他PCR法主要有以下優點：

　　1.全封閉反應，無需PCR后處理；

　　2.特異性強，靈敏度高；

　　3.采用對數期分析，摒棄終點數據，定量準確；

　　4.定量范圍寬，可達到10個數量級；

　　5.儀器在線式實時監測，結果直觀，避免人為判斷；

　　6.可實現一管雙檢或多檢；

　　7.操作安全，縮短時間，提高效率；

　　8.利于自動化和聯網管理。