熒光-PCR法技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床疾病診斷各種傳染病診斷和療效評(píng)價(jià)；臨床疾病診斷動(dòng)物疾病檢測(cè)；食源微生物、食品過敏源、轉(zhuǎn)基因研究等食品安全操作等等各個(gè)領(lǐng)域。目前的實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)主要是基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET)的原理，一對(duì)合適的熒光物質(zhì)可以構(gòu)成一個(gè)能量供體(donor)和能量受體(acceptor)對(duì)，其中供體的發(fā)射光譜與受體的吸收光譜重疊，當(dāng)它們?cè)诳臻g上相互接近到一定距離(1-10 nm)時(shí)，激發(fā)供體而產(chǎn)生的熒光能量正好被附近的受體吸收，使得供體發(fā)射的熒光強(qiáng)度衰減，受體熒光分子的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。
熒光-PCR法試劑盒具有高特異性，與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng)，無(wú)非特異性擴(kuò)增；檢測(cè)靈敏度可達(dá)10-100拷貝；操作簡(jiǎn)便，該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
熒光-PCR法的擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。在qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期，PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入平臺(tái)期，在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，只有在熒光信號(hào)的指數(shù)增長(zhǎng)期，PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。
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更新時(shí)間：2022-03-11
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