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    疏螺旋體PCR檢測試劑盒說明書

    產(chǎn)品簡介

    疏螺旋體PCR檢測試劑盒說明書
    上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
    OFQ/N檢測試劑盒
    N,N-二甲基乙酰胺(含干冰運輸費)
    2-氯-4-硝基苯胺
    葵子麝香
    己內(nèi)酰胺

    更新時間:2021-03-14
    訪問次數(shù):720
    詳細介紹在線留言

    注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

     產(chǎn)品名稱

     疏螺旋體PCR檢測試劑盒說明書

     英文名稱

     Borrelia afzelii PCR

     貨號

     LZP6475

    組成及試劑配制:
    1、酶標板:一塊(96孔)
    2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
    3、 樣品稀釋液:1×20ml。
    4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
    5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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    實驗過程:
    一、試劑準備
    1. DNA模板
    2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
    3.10×PCR Buffer
    4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
    5.Taq酶
    二、操作步驟
    1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
    dNTP mixl                 4μl
    引物1(10pM)               2μl
    引物2(10PM)              2μl
    Taq酶(2U/μl)            1μl
    DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
    ddH2O至               50 μl
    PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
    2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
    3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
    4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
    三、注意事項
    1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
    2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
    3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
    4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
    5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
    6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
    7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
    小鼠凝血因子XIII B(F13B)elisa試劑盒Anti-IL4 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細胞膜受體 G蛋白偶聯(lián)受體 表觀遺傳學 G蛋白信號  

    小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)elisa試劑盒Anti-IL4 Antibody研究領(lǐng)域  免疫學 生長因子和激素 糖尿病  

    小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eS-3)elisa試劑盒Anti-IL4R Antibody研究領(lǐng)域  細胞類型標志物  

    小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)elisa試劑盒Anti-IL4R Antibody研究領(lǐng)域  免疫學 神經(jīng)生物學  

    小鼠輪狀病毒(RV)抗原(Ag)elisa試劑盒Anti-IL4R Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學 生長因子和激素 轉(zhuǎn)運蛋白  

    小鼠巨噬細胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)elisa試劑盒Anti-IL4R Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 細胞類型標志物  

    小鼠膠原吡啶交聯(lián)(PYD)elisa試劑盒Anti-IL5RA Antibody研究領(lǐng)域  心血管 免疫學 發(fā)育生物學 干細胞 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 鋅指蛋白 表觀遺傳學  

    小鼠活化素A(ACV-A)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  免疫學 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 激酶和磷酸酶  

    小鼠骨特性堿性磷酸酶(BALP)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  免疫學 糖尿病  

    小鼠長停滯特異性基因產(chǎn)物6(gas-6)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學 新陳代謝  

    小鼠白血病抑制因子受體(LIFR)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學 細胞凋亡 細胞粘附分子 細胞表面分子  

    小鼠白介素9(IL-9)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學 神經(jīng)生物學  

    小鼠胺氧化酶(含黃素)A(MAOA)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學  

    小鼠γ干擾素受體(IFN-γR)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody產(chǎn)品類型  一抗  內(nèi)參抗體   

    小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)elisa試劑盒Anti-IL6R Antibody研究領(lǐng)域  免疫學 神經(jīng)生物學  

    1,2-二錄乙烷¤1,2-DichloroethaneAR500ml

    M5885-100gL-Proline L-脯安酸147-85-3100g42

    81325-5GPolygalacturonic acid 多聚半乳糖酸鈉25990-10-75g

    Hematoxylin and Eosin Staining Kit

    次甲基藍 (亞甲基藍)25g

    十二醇DodecalGCS2ml

    ER1652TauI250 units2

    G6251-25Gβ-Glycerophosphate diwo7ium β-甘油磷酸鈉819-83-025g

    肌酸酐5g

    肖鐿5g

    大鼠氧化酶(XOD)ELISA試劑盒 ,英文名: XOD ELISA Kit

    Rabbit oponin I (Tn- I) ELISA Kit 兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒

    腦膜炎奈瑟菌C群(NM-C)核酸檢測試劑盒 48T

    CLIAKitforMouselymphocytefactorELISAKit小鼠淋巴細胞因子規(guī)格:48T/96T

    體液過氧化氫(HYDROGENPEROXIDE)活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒20次

    ELISAKit2,3-DPG人2,3-二磷酸甘油酸規(guī)格:48T/96T
    疏螺旋體PCR檢測試劑盒說明書人肝癌細胞,Bel-7405細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

    人肝癌細胞,Hep G2細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

    人肝癌細胞,huh-7.5.1細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

    人肝癌細胞,huh-7.5細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

    人肝癌細胞,huh-7細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

    人肝癌細胞,MHCC-97L細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
    檢測步驟:
    一、 試劑的準備
    從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
    設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
    試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
    熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
    酶混合物 1 µL N×1 µL
    總量 15 µL N×15µL
    1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
    7.2 qPCR反應(yīng)條件
    將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
    推薦循環(huán)條件:
    1循環(huán) 50℃ for 2 min
    預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
    PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

     

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