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    牛呼吸道合胞體病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書

    產(chǎn)品簡(jiǎn)介

    牛呼吸道合胞體病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書
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    更新時(shí)間:2021-03-14
    訪問次數(shù):553
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    注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

     產(chǎn)品名稱

     牛呼吸道合胞體病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書

     英文名稱

     Bovine Respiartory Syncytial Virus(BRSV)RTPCR

     貨號(hào)

     LZP6499

    實(shí)驗(yàn)過程:
    一、試劑準(zhǔn)備
    1. DNA模板
    2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
    3.10×PCR Buffer
    4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
    5.Taq酶
    二、操作步驟
    1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
    dNTP mixl                 4μl
    引物1(10pM)               2μl
    引物2(10PM)              2μl
    Taq酶(2U/μl)            1μl
    DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
    ddH2O至               50 μl
    PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
    2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
    3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
    4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
    三、注意事項(xiàng)
    1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
    2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
    3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
    4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
    5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
    6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
    7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
    一、 試劑的準(zhǔn)備
    從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
    設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
    試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
    熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
    酶混合物 1 µL N×1 µL
    總量 15 µL N×15µL
    1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
    7.2 qPCR反應(yīng)條件
    將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
    推薦循環(huán)條件:
    1循環(huán) 50℃ for 2 min
    預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
    PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
    組成及試劑配制:
    1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
    2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
    3、 樣品稀釋液:1×20ml。
    4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
    5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
    小鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)elisa試劑盒Anti-MAP2K2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)elisa試劑盒Anti-MAP2K1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)elisa試劑盒Anti-MAP2K3 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠跨膜蛋白97(TMEM97/MAC30)elisa試劑盒Anti-MAP2K3 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠可溶性CD40配體(sCD40L)elisa試劑盒Anti-MAP2K3 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠抗弓形蟲IgM抗體elisa試劑盒Anti-MAP2K4 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠抗IgE受體抗體elisa試劑盒Anti-MAP2K4 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠基質(zhì)γ羧基谷氨酸蛋白(MGP)elisa試劑盒Anti-MAP2K7 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠肌球蛋白重鏈(MHC)elisa試劑盒Anti-MAP2K6 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠肌球蛋白(MYS)elisa試劑盒Anti-MAP2K6 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠活化素B(ACV-B)elisa試劑盒Anti-MAP2K7 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠骨成型蛋白9(BMP-9)elisa試劑盒Anti-MAP3K1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)elisa試劑盒Anti-MAP3K1(MEKK1) Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)elisa試劑盒Anti-MAP3K2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

    小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)elisa試劑盒Anti-MAP3K20 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 表觀遺傳學(xué)  

    黃色氧化鉛Lead oxide yellowAR500g

    P2126-10GL-pxenylalanine L-本丙安酸63-91-210g33

    Z0876-50mgTrans-Zeatin 反玉米素1637-39-450mg

    NP-40 Lysis Buffer100ml*5

    3-(N-嗎啉代)-2-羥基丙磺酸25g

    仲丁醇sec-butyl alcoholGCS2ml

    SCT-050-C-S0.5 ml 螺口尖底凍存管(無色)(已滅菌)(帶蓋)202

    M5625-5GVitamin K3 (Menadione) 維生素K3 (甲耐醌)58-27-55g

    胞嘧啶1g

    γ-環(huán)糊精250mg

    大鼠胰蛋白酶原酶(y)ELISA試劑盒 ,英文名: y ELISA Kit

    人抗腮腺管抗體(ai-parotidductAb)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanai-parotidductaibodyELISAKit 96T/48T

    大鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)免疫試劑盒 Rat alpha-L-fucosidase,AFU ELISA Kit

    CLIAKitforST2(HumanSomelysin-2)ELISAKit人基質(zhì)裂解素規(guī)格:48T/96T

    人血液補(bǔ)體蛋白C3免疫比濁法定量檢測(cè)試劑盒20次

    ELISAKitai-Ku-Ab人抗Ku抗體規(guī)格:48T/96T
    牛呼吸道合胞體病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書中介素抗體3-Acetoxy-4-cadinen-8-one中文名:別名:分子式:C17H26O3

    干擾素相關(guān)發(fā)育調(diào)節(jié)因子2抗體4(15)-Oppositene-1,7-diol中文名:別名:分子式:C15H26O2

    白介素-1受體拮抗劑抗體Arteannuin L中文名:別名:5-Hydroxy-4(15)-cadinen-12,6-olide分子式:C15H22O3

    整合素alpha E2 抗體Arteannuin N中文名:別名:5-Oxo-3-cadinen-12-oic acid分子式:C15H22O3

    胰島素抗體4-Cadinen-7-ol中文名:別名:分子式:C15H26O

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