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    加利福利亞腦炎病毒PCR檢測試劑盒說明書

    產(chǎn)品簡介

    加利福利亞腦炎病毒PCR檢測試劑盒說明書
    上海聯(lián)祖生物相關產(chǎn)品:
    IKBα檢測試劑盒
    XAF1(XIAP-associated factor 1) XIAP相關因子1凋亡抑制蛋白抗原
    XRCC1(X-ray Repair Cross Complementing 1) X射線修復交叉互補蛋白/細胞堿基切除修復基因抗原

    更新時間:2021-03-14
    訪問次數(shù):595
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    注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。

     產(chǎn)品名稱

     加利福利亞腦炎病毒PCR檢測試劑盒說明書

     英文名稱

     California Encephalitis VirusRTPCR

     貨號

     LZP6527

    實驗過程:
    一、試劑準備
    1. DNA模板
    2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
    3.10×PCR Buffer
    4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
    5.Taq酶
    二、操作步驟
    1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
    dNTP mixl                 4μl
    引物1(10pM)               2μl
    引物2(10PM)              2μl
    Taq酶(2U/μl)            1μl
    DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
    ddH2O至               50 μl
    PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
    2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
    3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
    4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
    三、注意事項
    1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
    2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
    3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
    4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
    5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
    6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
    7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
    一、 試劑的準備
    從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
    設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
    試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
    熒光PCR反應液 14µL N×14µL
    酶混合物 1 µL N×1 µL
    總量 15 µL N×15µL
    1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
    7.2 qPCR反應條件
    將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
    推薦循環(huán)條件:
    1循環(huán) 50℃ for 2 min
    預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
    PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
    組成及試劑配制:
    1、酶標板:一塊(96孔)
    2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
    3、 樣品稀釋液:1×20ml。
    4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
    5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
    人活化素A(ACV-A)elisa試劑盒Anti-NR3C2 Antibody研究領域  細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學 Alzheimer's

    人骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)elisa試劑盒Anti-NR4A2 Antibody研究領域  細胞生物 免疫學

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    人促胃液素受體(GsaR)elisa試劑盒Anti-NRG1 Antibody研究領域  免疫學 神經(jīng)生物學

    β-微精原蛋白(MSMB/PRSP)elisa試劑盒Anti-NRG1 Antibody研究領域  腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導

    CD6分子(CD6)elisa試劑盒Anti-NRG2 Antibody研究領域  腫瘤 細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學

    CD34分子(CD34)elisa試劑盒Anti-NRIP1 Antibody研究領域  神經(jīng)生物學 信號轉導 細胞骨架 細胞外基質

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    3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A合酶1(HMGCS1)elisa試劑盒Anti-NRP1 Antibody(原貨號PB0320)研究領域  腫瘤 心血管 神經(jīng)生物學 信號轉導 細胞類型標志物

    25羥基維生素D3(25 HVD3)elisa試劑盒Anti-NRXN1 Antibody研究領域  神經(jīng)生物學 干細胞 表觀遺傳學

    犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)elisa試劑盒Anti-NRXN1 Antibody研究領域  免疫學 表觀遺傳學

    S100鈣結合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)elisa試劑盒Anti-NSF Antibody研究領域  細胞生物 信號轉導 細胞膜蛋白

    磷酸氫二銨Diammonium xy7gen phosphateAR500g

    C8755-100GL-Cystine L-胱安酸56-89-3100g36

    A0339-5GAmpicillin,wo7ium salt 安芐青霉素鈉69-52-35g

    SDS-PAGE凝膠配制試劑盒~50T

    NADH, Reduced, Diwo7ium Salt, Trihydrate1g

    丁二酸二甲酯Dimetxyl succinate色標5ml

    SCT-050-A0.5 ml 螺口尖底凍存管(雜色)(帶蓋)134

    G0304-500MGGentamycin sulfate 流慶大霉素1405-41-0500mg

    Deoxycholic Acid, wo7ium Salt50g

    秋仙堿ColchicinepR1g

    大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白3(IGFBP3)ELISA試劑盒 ,英文名: IGFBP3 ELISA Kit

    Mouse visceral adipose specific serine protease inhibitor (vaspin) ELISA Kit 小鼠內臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑(vaspin)ELISA試劑盒

    MouseVascularEndothelialcellGrowthFactor,VEGFELISAKIT 小鼠血管內皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

    CLIAKitforHumanCyclicAMPresponseelemebindingprotein,CREBELISAKit人cAMP反應元件結合蛋白規(guī)格:48T/96T

    細胞AX1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

    ELISAKitALP-B大鼠骨特異性堿性磷酸酶B規(guī)格:48T/96T
    加利福利亞腦炎病毒PCR檢測試劑盒說明書人毛細胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

    人脂肪間充質干細胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

    人脂肪微血管內皮細胞,HAMECC細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

    人支氣管平滑肌細胞,HBSMCL細胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

    人支氣管平滑肌細胞,HBSMCTR細胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

    人支氣管上皮細胞,HBECL細胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

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