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惡臭假單胞菌PCR檢測試劑盒規格

產品簡介

惡臭假單胞菌PCR檢測試劑盒規格
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LCN2檢測試劑盒先進的優化方案——回收利用率高、可靠性強

更新時間:2021-03-13
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

 產品名稱

 惡臭假單胞菌PCR檢測試劑盒規格

 英文名稱

 Pseudomonas putidaPCR

 貨號

 LZP7200

實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
DMSO氧化鉭 SP乙(95%) CP,95.0%

MSM氧化鉭(V)  99.99% metals basis,用于光學玻璃或單晶乙(95%)  for HPLC

DMSO-d6氧化鉭(V) 99.5%乙(95%) GR,95.0%        

SDP氧化鉭(V)  99.99% metals basis,<2 μm,用于鍍膜乙(95%)  ACS

Diphenyl sulfone鉭桿 diam. 3 mm, ≥99.95% metals basis95%藥用酒精 藥用級

Sulfolane鉭 99.95%,Φ0.5mm電容器用95%乙 光譜純

n-Amyl ether高比容鉭粉 30K高哌 98%

4,4'-Azoxyanisole高比容鉭粉 23K2-基吡啶 98%

BHA高比容鉭粉 50K乙基黃原酸 AR,95%

ODA2,6-二胺 96%乙基黃原酸 98%

Diphenyl ether4,4'-二羥基二苯砜 99%2-氨基嘧啶 98%

18-Crown-62,6-二硝基氯苯 98%2-(3-氯苯氧基)酸 98%

alpha-PGME硫酸鉻,合 CP,用于合成1-甲酰哌啶 99%

PMSF硫酸鉻,合 電鍍級3-吡啶甲 98%

Calcium hydrogenphosphate dihydrate硫酸鉻,合 99.999% metals basis反-玉米素 98%

Calcium carbonate乙酸鉻 CP,97.0%偏釩酸銨 CP,98%

頭孢噻呋鈉Intracellular Flow Cytometry Kit (Methal)Rabbit Anti-Avidin/APC  APC標記的兔抗親和素

頭孢噻呋鈉(標準品)JARID2 (D6M9X) Rabbit mAbRabbit Anti-Avidin/AP  堿性磷酸酶(AP)標記的兔抗親和素

硫酸鈉JARID2 (D6M9X) Rabbit mAbRabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的兔抗親和素

5'-三磷酸胞苷二鈉鹽(二)Cox2 (D5H5) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Rabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的兔抗親和素

伏格列波糖DAPP1/BAM32 (D9K4O) Rabbit mAbRabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的兔抗親和素

伏格列波糖(標準品)GKAP AntibodyRabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的兔抗親和素

克里唑啼尼;克里唑替尼,CrizotinibAMPA Receptor 2 (GluA2) (E1L8U) Rabbit mAbRabbit anti-Avidin whole serum  兔抗親和素抗血清

BMS 582664Phospho-TTF-1 (Ser327) AntibodyRabbit Anti-Avidin  兔抗親和素

龍膽二糖DNA Polymerase γ (D1Y6R) Rabbit mAbRAB9  ras癌基因家族Rab9蛋白抗體

鹽酸異腎上腺素(標準品)RBL2 (D9T7M) Rabbit mAbRAB8B  ras癌基因家族RAB8B抗體
惡臭假單胞菌PCR檢測試劑盒規格人血纖蛋白原降解產物(FDP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1克

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人血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

人血小板反應蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT25克

人血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:保存:-20℃100毫克

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