爾斯布朗病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
Carbon ActivatedN-Fmoc-S-(4-甲氧基芐基)-L-半胱氨酸  98%烯效唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品97.5%

Acid red 66Fmoc-S-叔丁基-L-半胱氨酸 98%乙烯菌核利 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%

m-Cresol purpleFmoc-L-谷氨酸γ芐脂 BR乙烯菌核利標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:酮

Diphenylaminesulfonic acid sodium saltN-芴甲氧羰基-D-谷氨酸 gamma-叔丁酯 98%乙烯菌核利標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:酮

Chicago sky blue 6BN-Fmoc-N'-三苯甲基-L-組氨酸 98%滅草猛 分析標(biāo)準(zhǔn)品，97%

MucicarmineN,N'-雙(9-芴甲氧羰基)-L-組氨酸 98%滅草猛 分析標(biāo)準(zhǔn)品

Methyl blueFmoc-L-異亮氨酸 98.5%二甲基硅油DC-200 GC,粘度~350 mPa.s, neat(25 °C)

AMCFmoc-D-亮氨酸 BR二甲基硅油DC-200 粘度~10 mPa.s, neat(25 °C)

CoumarinFmoc-(2-氯芐氧基羰基)賴氨酸 98.5%二甲基硅油DC-200 粘度~20 mPa.s, neat(25 °C)

AzophloxineFmoc-N'-三氟乙酰基-L-賴氨酸 96%二甲基硅油DC-200 粘度~50 mPa.s, neat(25 °C)

Pyrosine BFmoc-D-脯氨酸 BR二甲基硅油DC-200 粘度~100 mPa.s, neat(25 °C)

LCVFmoc-O-叔丁基-D-絲氨酸 98%二甲基硅油DC-200 粘度~200 mPa.s, neat(25 °C)

Leucomalachite GreenFmoc-O-芐基-L-絲氨酸 98%二甲基硅油DC-200 粘度~500 mPa.s, neat(25 °C)

Carbol fuchsinFMOC-O-叔丁基-L-絲氨酸  98%二甲基硅油DC-200 粘度~1000 mPa.s, neat(25 °C)

Erioglaucine disodium saltFmoc-O-三苯甲基-L-絲氨酸 98%  二甲基硅油DC-200 粘度~30000 mPa.s, neat(25 °C)

CalmagiteFmoc-O-三苯甲基-L-蘇氨酸 99%二甲基硅油DC-200 粘度~60000 mPa.s, neat(25 °C)

甲酸銨(用于質(zhì)譜,≥99.0%)Cdc6 (C42F7) Rabbit mAbMouse Anti-Guinea pig IgG/AP  堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG

苯甲(色譜級(jí), ≥99.5%(GC))Cdc6 (C42F7) Rabbit mAbMouse Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG

甲基叔丁基(農(nóng)殘級(jí),≥99.9%(GC）)RRM1 AntibodyMouse Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG

甲基叔丁基(GC,≥99.9%(GC))LPP (8B3A11) Mouse mAbMouse Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG

二氯(農(nóng)殘級(jí),≥99.9%,,含50-150ppm戊烯穩(wěn)定劑)Vimentin (5G3F10) Mouse mAbMouse Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG

1,4-二氧六環(huán)(農(nóng)殘級(jí))Phospho-c-Kit (Tyr719) AntibodyMouse Anti-Guinea pig IgG  小鼠抗豚鼠IgG

化銫(用于高通量質(zhì)譜,99.9995%)Phospho-c-Kit (Tyr719) AntibodyMouse Anti-Goat IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的小鼠抗羊IgG

氯苯(for HPLC, ≥99.5%)Phospho-c-Kit (Tyr719) AntibodyMouse Anti-Goat IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗羊IgG

1,3-二甲基-2-咪唑啉酮(用于GC-HS,≥99.8%(GC))RYBP AntibodyMouse Anti-Goat IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗羊IgG

二甲基亞砜(農(nóng)殘級(jí))c-Kit AntibodyMouse Anti-Goat IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗羊IgG
爾斯布朗病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格羥類固醇脫氫酶17β抗體Coronarin E中文名：別名：15,16-Epoxy-8(17),11,13(16),14-labdatetraene分子式：C20H28O

同源盒蛋白PRH抗體Scutebata B中文名：別名：分子式：C35H3910

透明質(zhì)酸合成酶1抗體Adenanthin中文名：腺花素別名：分子式：C26H34O9

透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白4抗體Echiphyllin C中文名：別名：分子式：C20H293

A型流感病毒H5N1凝集素抗體Scutebata F中文名：別名：Barbatine C分子式：C30H379