副流感病毒Ⅲ型PCR檢測試劑盒說明書

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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
阿糖胞苷（標準品）C27H30O151-溴-基烷

達卡巴C35H46O191,2-環氧十二烷

達卡巴(標準品)C34H44O192-環己基溴烷

達沙替尼（無水）C27H30O16(溴甲基)環烷

達沙替尼（無水）（標準品）C52H86O21溴戊烷

達托霉素C15H12O61,2,3,4,5,6-六環己烷

達托霉素(標準品)C35H49NO9溴代環己烷

鹽酸柔紅霉素C32H46O16叔丁基二基硅烷

鹽酸柔紅霉素(標準品)C41H64O131-溴十八烷

鹽酸柔紅霉素(進口)C29H34O152-(2-溴基)-1,二噁烷

地西他濱/ 5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷C20H20O4頻那

地西他濱/ 5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷（標準品）C19H21NO2聯環己烷

5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷C16H12O5四

醋酸德舍瑞林C21H21O117,7,8,8-四基醌二

去氨加壓素;去氨壓素C15H11O6Cl異酸基三氧基硅烷

莫匹羅星,假單胞菌酸C21H26O10四甲基硅烷

匹伐他汀叔丁酯C28H32O161,4,8,11-四甲基-1,4,8,11-四氮雜-環一十四烷

己雌酚()C16H18O102,6,10,1四甲基十五烷

22(IL-22)ELISA試劑盒Phospho-Ack1(Tyr326)  酸化Ack1100 ug

2(IL-2)ELISA試劑盒ACTH (1-39)  促腎上腺皮質激素(1-39)1 Kit

1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒ACTH (18-39)  促腎上腺皮質激素ACTH(18-39)100 ul

1β (IL-1β)ELISA試劑盒ACTH (7-23)  促腎上腺皮質激素ACTH (7-23)100 ug

1α(IL-1α)ELISA試劑盒Actin alpha  肌動蛋白α100 ug

18(IL-18)ELISA試劑盒Actinin alpha 4  α-輔肌動蛋白4100 ug

17(IL-17)ELISA試劑盒F-Actin  纖維狀肌動蛋白100 ul

15(IL-15)ELISA試劑盒AD7c-NTP  神經絲蛋白100 ug

13(IL-13)ELISA試劑盒AD7C-NTP(human)  神經絲蛋白（）100 ul
副流感病毒Ⅲ型PCR檢測試劑盒說明書轉錄激活因子MYB抗體Pteryxin中文名：北美芹素別名：(+)-Pteryxin分子式：C21H22O7

原癌基因cMAF抗體Phellopterin中文名：珊瑚菜素別名：分子式：C17H16O5

19號染色體開放閱讀框46抗體Byakangelicin中文名：白當歸素別名：分子式：C17H18O7

8號染色體開放閱讀框70抗體Glycyrin中文名：別名：分子式：C22H22O6

富含半胱氨酸C端蛋白1抗體(-)-Heraclel中文名：別名：分子式：C16H16O6