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    微生物致病菌PCR快速系列規格

    產品簡介

    合盒轉運蛋白4抗體6-Acetonyl-N-methyl-dihydrodecarine中文名:別名:分子式:C23H215

    肌動蛋白結合蛋白LIM3抗體3-Furfuryl 2-pyrrolecarboxylate中文名:別名:分子式:C10H93

    高爾基復合體相關蛋白1抗體Vincosamide中文名:喜果苷別名

    更新時間:2021-03-13
    訪問次數:546
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    注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

     產品名稱

     微生物致病菌PCR快速系列規格

     規格

     50T

     貨號

     LZP7828

    實驗過程:
    一、試劑準備
    1. DNA模板
    2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
    3.10×PCR Buffer
    4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
    5.Taq酶
    二、操作步驟
    1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
    dNTP mixl                 4μl
    引物1(10pM)               2μl
    引物2(10PM)              2μl
    Taq酶(2U/μl)            1μl
    DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
    ddH2O至               50 μl
    PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
    2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
    3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
    4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
    三、注意事項
    1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
    2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
    3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
    4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
    5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
    6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
    7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
    一、 試劑的準備
    從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
    設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
    試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
    熒光PCR反應液 14µL N×14µL
    酶混合物 1 µL N×1 µL
    總量 15 µL N×15µL
    1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
    7.2 qPCR反應條件
    將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
    推薦循環條件:
    1循環 50℃ for 2 min
    預變性 1循環 95℃ for 10 min
    PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
    組成及試劑配制:
    1、酶標板:一塊(96孔)
    2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
    3、 樣品稀釋液:1×20ml。
    4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
    5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
    2-己酮(standard for GC,>99.5%(GC))ATGL (30A4) Rabbit mAbalpha,alpha-二酸

    正庚(standard for GC,≥98%(GC))Mig6 Antibody1,2-二溴四氟

    七氟丁酸(98%)Phospho-eIF4G (Ser1108) Antibody2,6-二溴-

    2,5-己二酮(standard for GC,≥99%(GC))Phospho-eIF4G (Ser1108) Antibody二酸單甲酯單鹽

    2,5-己二酮(分析標準品,≥99.5%(GC))HSP27 Antibody (Rodent Preferred)(R)-1-BOC-羥甲基哌

    己烷(分析標準品,≥99.8% (GC))PPARγ (81B8) Rabbit mAb5-羥基煙酸

    六氟異(HFIP)(用于GC衍生化, ≥99.8% (GC))eIF4H Antibody1,2,4,5-環己烷四甲酸二酐

    甲酸(標準品)VEGF-C Antibody酰氨基環己酮

    (standard for GC, ≥99.5% (GC))PDI Antibody咪唑并[1,2-a]嘧啶

    鄰二甲酸二正戊酯(CP,97%)AS160 Antibody-甲酸

    3',3'',5',5''-四溴酚酞酯(80%,用于顯微鏡)Glu-Glu Tag Antibody-2,8-雙(三氟甲基)喹啉

    (無水級,≥99%,含100-200ppm戊穩定劑)PRMT1 (A33) Antibody咪唑并[1,2-a]吡啶

    (無水級, 99.5%)APP/β-Amyloid (NAB228) Mouse mAb氟鄰二甲酸

    (無水級,≥99.9%, 無穩定劑)APP/β-Amyloid (NAB228) Mouse mAb2,二氟甲酸

    (ACS,>99.5%(GC))APP Antibody溴-1-甲基-1H-吡唑

    正庚烷(AR,98%)PRMT1 (F339) Antibody2,4,5-三氟溴芐

    正庚烷(分析標準品,≥99.8%(GC))Neuronal Marker IF Antibody Sampler Kit II1-叔丁氧羰基-哌啶酸

    正庚烷(>99%(GC))PathScan® Total Btk Sandwich ELISA Kit溴鄰二

    GDP解離抑制因子2(GdI2)ELISA試劑盒MDM2  雙微體2癌基因100 ul

    GAD/IA2自身ELISA試劑盒Phospho-MDM2 (Ser166)  酸化雙微體2癌基因100 ul

    G1/S特異性細胞周期蛋白E1(CCNE1)ELISA試劑盒MDR1/p-GP/CD243  多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白100 ul

    F-肌動蛋白(F-actin)ELISA試劑盒MEF2A  肌細胞增強因子2100 ul

    FOS 樣抗原2(FOSL2)ELISA試劑盒Phospho-MEF2A (Thr312)  酸化肌細胞增強因子2500 ul

    FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt-3L)ELISA試劑盒Phospho-MEF2A (Ser408)  酸化肌細胞增強因子2300 ul

    FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA試劑盒Megsin  絲氨酸蛋白酶抑制劑B7100 ul

    Fc受體樣蛋白3(FCRL3)ELISA試劑盒Melamine  三聚20 ul

    FAM172A蛋白(FAM172A)ELISA試劑盒Melamine  三聚300 ul
    微生物致病菌PCR快速系列規格腺苷三磷酸結合盒轉運體9抗體Alstonine中文名:別名:分子式:C21H20N2O3

    三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白4抗體6-Acetonyl-N-methyl-dihydrodecarine中文名:別名:分子式:C23H215

    肌動蛋白結合蛋白LIM3抗體3-Furfuryl 2-pyrrolecarboxylate中文名:別名:分子式:C10H93

    高爾基復合體相關蛋白1抗體Vincosamide中文名:喜果苷別名:Vincoside lactam分子式:C26H30N2O8

    乙酰輔酶A羧化酶1ACCα抗體Corypalmine中文名:紫堇根堿別名:分子式:C20H234

     

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