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    當前位置:首頁  -  產品中心  -  PCR試劑盒  -  熒光-PCR法  -  48T惡性瘧原蟲(PF)核酸試劑盒說明書

    惡性瘧原蟲(PF)核酸試劑盒說明書

    產品簡介

    惡性瘧原蟲(PF)核酸試劑盒說明書
    上海聯祖生物相關產品:
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    更新時間:2021-03-13
    訪問次數:844
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    注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

     產品名稱

     惡性瘧原蟲(PF)核酸試劑盒說明書

     規格

     48T

     貨號

     LZP8107

    實驗過程:
    一、試劑準備
    1. DNA模板
    2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
    3.10×PCR Buffer
    4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
    5.Taq酶
    二、操作步驟
    1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
    dNTP mixl                 4μl
    引物1(10pM)               2μl
    引物2(10PM)              2μl
    Taq酶(2U/μl)            1μl
    DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
    ddH2O至               50 μl
    PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
    2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
    3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
    4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
    三、注意事項
    1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
    2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
    3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
    4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
    5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
    6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
    7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
    一、 試劑的準備
    從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
    設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
    試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
    熒光PCR反應液 14µL N×14µL
    酶混合物 1 µL N×1 µL
    總量 15 µL N×15µL
    1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
    7.2 qPCR反應條件
    將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
    推薦循環條件:
    1循環 50℃ for 2 min
    預變性 1循環 95℃ for 10 min
    PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
    組成及試劑配制:
    1、酶標板:一塊(96孔)
    2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
    3、 樣品稀釋液:1×20ml。
    4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
    5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
    五味子甲(標準品)基吡啶

    五味子(標準品)吡啶甲

    五味子甲素(標準品)Boc-L-高氨酸

    五味子素(標準品)1,二

    五味子酯甲(標準品)N-甲基環己

    西貝母(標準品)N-

    西紅花苷,α-藏花素(標準品)肼

    西紅花苷I(標準品)甲

    西紅花苷II(標準品)基硫

    細葉遠志皂苷(標準品)2-基吡啶

    仙鶴草酚B(標準品)5-溴吲哚

    血根(標準品)甲基芐

    香草酸(標準品)間羥基甲

    香草酸芐基*基氫氧化銨

    香蒲新苷(標準品)2--5-硝基茴香

    香葉木素-7-O-葡萄糖苷(標準品)烏洛托品

    香紫蘇(標準品)*

    小檗(標準品)硫酸鎳七水合物

    肌動蛋白相關蛋白2/3復合亞單位B1ocludin-5/FITC  熒光素標記緊密連接蛋白-5IgG100 ul

    三酸腺苷結合轉運蛋白G超家族成員2CLDN3/Claudin 3/FITC  熒光素標記緊密連接蛋白3IgG20 ul

    甲胎蛋白CLDN4/Claudin 4/FITC  熒光素標記緊密連接蛋白4IgG500 ul

    毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白CLDN5/FITC  熒光素標記緊密連接蛋白5IgG100 ul

    ATP結合盒轉運蛋白2CLEC-1/CLEC1A/FITC  熒光素標記C型凝集素結構域家族1成員AIgG100 ul

    肌動蛋白結合蛋白LIM蛋白3CLEC-2/CLEC1B/FITC  熒光素標記C型凝集素結構域家族1成員BIgG20 ul

    酸性鈣調蛋白3CLEC2D/OCIL/FITC  熒光素標記CLEC2D蛋白IgG100µl

    酸化CD156bCLEC5A/MDL1/FITC  熒光素標記C型凝集素結構域家族5成員AIgG100 ul

    脫氫酶5CLEC13D/MMR1/CD206/FITC  熒光素標記巨噬細胞甘露糖受體IgG300 ul
    惡性瘧原蟲(PF)核酸試劑盒說明書N-乙酰半乳糖胺糖蛋白3、β-半乳糖轉移酶1抗體Coumestrol中文名:香豆雌酚別名:分子式:C15H8O5

    過氧化氫誘導轉錄蛋白1抗體Psoralidin中文名:別名:分子式:C20H16O5

    核因子NFκB激活蛋白1抗體Fraxetin中文名:秦皮素別名:分子式:C10H8O5

    12號染色體開放閱讀框23抗體Demethylsuberosin中文名:去甲基軟木花椒素別名:分子式:C14H14O3

    γ-連環素/連接蛋白γ抗體Daphretin中文名:西瑞香素別名:分子式:C19H12O7

     

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