VEGF-D血管內皮細胞生長因子DELISA試劑盒

產品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

大鼠可溶性瘦素受體(sLR)試劑盒鹽水(1×NS,無菌)Boc-L-谷氨酰 98%2--4-硝吡啶 98.0%

大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)試劑盒鹽水(10×NS,無菌)N-叔丁氧羰-D-3-苯氨 98%L-蘋果二酯 98%

大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)試劑盒無菌雙蒸水Boc-N--L-纈氨 98%2,4-二 97%

大鼠艾杜糖硫酯(IDS)試劑盒 無菌雙蒸水BOC-D-氨 98%D-蘋果二酯 98%

大鼠艾杜糖硫酯(IDS)試劑盒 碳鈉-碳氫鈉緩沖液(0.1mol/L,pH9.16-10.83)Nα-叔丁氧羰-N'--L-色氨 97%4-氟吡啶鹽鹽  98%

大鼠血管內皮生長因子(VEGF)試劑盒 碳氫鈉溶液(1mol/L,pH8.3-9.0)Boc-D-酪氨 98%5-羥-1-茚 98%

大鼠血管內皮生長因子(VEGF)試劑盒 亞硝鈉水溶液(1%)N,N'-二叔丁氧羰-L-賴氨二環己鹽 98%4-羥吲哚 98%

大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)試劑盒 乙溶液(75%)BOC-D-苯甘氨 98%鹽 98%

大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)試劑盒 乙銨溶液(1mol/L,無菌)BOC-L-異亮氨 99%3--4-硝吡啶-N-氧化物 98%

大鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)試劑盒 乙緩沖液(0.1mol/L,pH3.6-5.6)N-叔丁氧羰-S-三苯-L-半胱氨 99% 2--4-硝氧化吡啶 98%

大鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)試劑盒 乙溶液(3mol/L,pH5.5)叔丁氧羰-L-賴氨  98%間三氟酯 99%

大鼠干因子/肥大生長因子(SCF/MGF)試劑盒乙溶液(5mol/L,pH4.8)N-Boc-4-氧-L-脯氨酯 97%4-哌啶鹽鹽，水合 98%

大鼠干因子/肥大生長因子(SCF/MGF)試劑盒乙鈉溶液(3mol/L,pH5.2)N-叔丁氧羰-2-氨  98%4-氨三氟苯 98%

大鼠煙酰腺嘌呤二核磷(NADPH)試劑盒乙鈉溶液(3mol/L,pH5.2)(S)-N-BOC-4-溴苯氨 98%鄰三氟 98%

大鼠煙酰腺嘌呤二核磷(NADPH)試劑盒乙鈉溶液(3mol/L,pH5.2,無菌)叔丁二硅烷 97%3-(三氟)苯酰 98%

大鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)試劑盒乙鈉溶液(3mol/L,pH5.2,無菌)D- 98%4-(三氟)苯 96%
VEGF-D血管內皮細胞生長因子DELISA試劑盒用途：

又稱促藍液，用于染色后藍化，尤其推薦用于Gill'sⅢ藍化藍化。

注意事項：

主要由硫鎂、碳氫鈉等組成。

儲存條件：室溫，12個月

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。