DGKZ酯酰甘油激酶ζELISA試劑盒

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機(jī)

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

狀腺素(T4)試劑盒洋川芎內(nèi)酯A亞藍(lán)  超純級(jí),Dye content, >90%(HPLC)納米氮化鋁 99.9% metals basis,50nm

狀腺素(T4)試劑盒洋川芎內(nèi)酯H孔雀石綠 AR氮化鋁 N >33.0%， D50/2.0 μm

狀腺素(T4)試劑盒洋川芎內(nèi)酯I鎂試劑Ⅰ 高純級(jí),90%氮化鋁 N >32.5 % ，D97/5.0 μm

狀腺素(T4)試劑盒洋地黃鎂試劑Ⅰ AR納米鋇鐵氧體 30-50nm 球形 99.5%

游離狀腺素(FT4)試劑盒氧代川南亭鎂試劑Ⅱ AR納米鋇鐵氧體 200nm,99%

游離狀腺素(FT4)試劑盒氧海紫 AR納米鉍粉 99.9% metals basis,40nm,球形

游離三狀腺原氨(Free-T3)試劑盒氧化白藜蘆紫 IND(pH 0.1-2.0)三氧化二鉻 60nm 球形，98.0%

游離三狀腺原氨(Free-T3)試劑盒氧化槐定1-亞硝-2-萘酚 96%納米鐵鈷 40nm 球形 99.5%

新生狀腺素(NN-T4)試劑盒氧化槐果橙黃G BS納米碳粉 99.5%，30nm

新生狀腺素(NN-T4)試劑盒氧化苦參橙黃G   AR，≥80.0% (HPLC)四氧化三鈷 30nm 球形，99.5%

胰島素(INS)試劑盒氧化前胡素橙黃G   AR，≥80.0% (HPLC)氧化鏑 40nm 球形，99.5%

胰島素(INS)試劑盒氧化芍藥橙黃G ≥96%(HPLC)石墨 99%，40nm

C肽(C-Peptide)試劑盒氧化石蒜油紅O Biological stain納米羥磷灰石 nanopowder,<100 nm particle size (BET), ≥97%

C肽(C-Peptide)試劑盒氧化小檗橙黃Ⅳ Indicator納米四氧化三鐵 99.5%,20nm 球形

絨毛膜(HCG)試劑盒氧化型橙黃Ⅰ Biological stain鎂 99.5%，50nm,灰色

絨毛膜(HCG)試劑盒藥根橙黃Ⅰ Indicator氧化釹 40nm 球形，99.5%
DGKZ酯酰甘油激酶ζELISA試劑盒本探針一種線粒體綠色熒光探針，可以用于活細(xì)胞線粒體特異性熒光染色。

本探針為采用Molecular Probes公司的carbocyanine進(jìn)行了熒光標(biāo)記的一種Mito-Tracker，分子量為671.88，可以用作線粒體特異性的熒光探針。和rhodamine 123或JC-1相比，本探針對于線粒體的染色不依賴于線粒體膜電位。

本探針可以用于對活細(xì)胞的染色，但染色后如果固定會(huì)導(dǎo)致染色消退。本探針呈綠色熒光，檢測時(shí)的大激發(fā)波長為490nm，大發(fā)射波長為516nm。按終工作濃度為20-200nM計(jì)算，可以配制約370-3700ml 本探針工作液。

儲(chǔ)存條件：-20℃避光，有效期半年。

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。