FABP脂肪酸結(jié)合蛋白ELISA試劑盒

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

產(chǎn)品屬性：

檢測(cè)程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機(jī)

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)試劑盒 育亨賓鄰氨苯 98%2-氟-3-氧苯 97%

脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)試劑盒 愈創(chuàng)甘油3，3-二苯 99%2-氟-4- 96%

過(guò)氧化(GSH-Px)試劑盒 愈創(chuàng)木酚1-二氫茚 99%2-氟-5-三氟 98%

過(guò)氧化(GSH-Px)試劑盒 鳶尾二酰 97%2-氟-6-氧苯 98%

(GSH)試劑盒 鳶尾黃素4-硝肉桂 98%3-氟-4- 97%

(GSH)試劑盒 原阿片苯二 98%4-氟苯 99%

17-類固(17-KS)試劑盒 原百部次3,4,5-三氧肉桂 99%2-氟-4-(三氟)苯 97%

17-類固(17-KS)試劑盒 原百部二苯（2，4，6-三酰）氧化膦 97%3-羥 97%

17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)試劑盒原兒茶槲皮素,二水 97%2-羥苯 97%

17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)試劑盒原兒茶槲皮素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98.5%3-羥苯 97%

組織蛋白K(cath-K)試劑盒 原花青素槲皮素 97%4-異喹啉鹽鹽 98%

組織蛋白K(cath-K)試劑盒 原花青素B1槲皮素,二水 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98% (HPLC)4-異苯 98%

骨形成蛋白(BMPs)試劑盒原花青素B2L-鼠李糖，一水 99%4-異氧苯 98%

骨形成蛋白(BMPs)試劑盒原七葉皂元二氧化硫脲 98%6-氧-2-萘 97%

視黃結(jié)合蛋白4(RBP-4)試劑盒原參二4,5-二鄰苯二 98%4-氧-2-三氟 96%

視黃結(jié)合蛋白4(RBP-4)試劑盒原參三酰肼 90%3-氧羰苯  97%
FABP脂肪酸結(jié)合蛋白ELISA試劑盒NF-κB是一個(gè)多向性核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,可調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、趨化因子、粘附分子、生長(zhǎng)因子、免疫受體、氧化應(yīng)激相關(guān)酶、轉(zhuǎn)錄因子、急性時(shí)相蛋白等基因的表達(dá),功能涉及相應(yīng)的許多生理、病理過(guò)程。

DAPI 是一種藍(lán)色核染料，優(yōu)先染dsDNA，DAPI 表現(xiàn)為可集中結(jié)合在DNA 雙鏈的AT 小溝，結(jié)合后的DAPI 熒光會(huì)發(fā)生20 倍增強(qiáng)。同時(shí)，DAPI 也可以結(jié)合RNA，與DNA 不同，一般認(rèn)為DAPI 結(jié)合于RNA 的AU 區(qū)。DAPI/RNA 的復(fù)合體（500nm）有比DAPI/dsDNA復(fù)合體（460nm）更長(zhǎng)的熒光波長(zhǎng)。DAPI 是一種常用的多色熒光技術(shù)中的核復(fù)染劑。

NF-κβ作為一種廣泛存在的轉(zhuǎn)錄因子，被激活由胞漿轉(zhuǎn)入胞核，從而參與炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生等。可以將細(xì)胞核和NF-κβ分別用DAPI 和FITC 染色，可觀察每個(gè)細(xì)胞是否發(fā)生NF-κβ核轉(zhuǎn)位，并量化分析NFkB 核轉(zhuǎn)位程度以及發(fā)生核轉(zhuǎn)位細(xì)胞的比例。

C-jun 屬于即早基因(immediate early genes,IEGs)成員之一。而即早基因是原癌基因家族成員,常在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、凋亡、創(chuàng)傷、應(yīng)激等反應(yīng)的早期出現(xiàn)表達(dá)變化。即早基因通常在細(xì)胞內(nèi)作為第三信使,受信號(hào)通路調(diào)節(jié)后作用于核內(nèi)調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄。

儲(chǔ)存：4℃，有效期十二個(gè)月。