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    產(chǎn)品中心

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    95D細胞

    產(chǎn)品簡介

    95D細胞公司相關(guān)產(chǎn)品:
    范可尼貧血相關(guān)蛋白M抗體Integrin Alpha2b/CD41/FITC 熒光素標(biāo)記血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體IgG
    軟骨Ezrin樣蛋白抗體Integrin Alpha3/FITC 熒光素標(biāo)記整合素α3抗體IgG

    更新時間:2021-08-30
    訪問次數(shù):972
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    我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價,產(chǎn)品貨期短,價格優(yōu),售后齊全。

    產(chǎn)品名稱:肺巨細胞癌細胞(高轉(zhuǎn)移)
    英文簡稱:95D細胞

    貨號:LZ-X969484
    規(guī)格:T25
    生長特性:貼壁

    圖片2.jpg 

    凍存培養(yǎng)基:
    凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
    1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 
    2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
    培養(yǎng)細胞凍存方案:
    以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
    1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
    2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
    3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
    4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
    注:離心速度和時間取決于細胞種類。
    5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
    6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
    7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低  1°C?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

    圖片2.jpg 

    實驗材料: 
    1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶 
    2. 100ml滅菌燒杯2個;
    3、50ml離心筒2個 
    4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個 
    5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個 
    6、細胞計數(shù)板1塊; 
    7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把; 
    8、酒精燈1臺;

    實驗報告:
    一、分離與培養(yǎng):
       1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
       2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
       3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
       4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
       5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
    二、免疫熒光鑒定:
       1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
       2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
       3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
       4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
       5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
       6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
    鏡下觀察圖像并拍照。

    天藍色鏈霉菌黃芩苷;BaicalinDubos肉湯基礎(chǔ)DubosBrothBase肝再生增強因子抗體

    燼灰鏈霉菌黃藤素;PalmatinechloriDubos肉湯基礎(chǔ)添加劑抗堿性磷酸酶抗體

    產(chǎn)色鏈霉菌灰氈毛忍冬皂苷乙;MacranthoidDubos油酸瓊脂基礎(chǔ)DubosOleicAgarBaseα-甲基?;o酶A消旋酶抗體

    雙重輪絲鏈霉菌黃芪甲苷;AstragalosideIDubos油酸瓊脂基礎(chǔ)添加劑神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體

    金霉素鏈霉菌虎杖苷;Polydatin小川氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)β淀粉樣肽1-42(C端抗體)

    白色鏈霉菌槲皮苷;Quercitrin培養(yǎng)基β淀粉樣肽(1-16)抗體

    白黃鏈霉菌蒿甲;ArtemetherMiddleBrook7H10瓊脂基礎(chǔ)MiddleBrook7H10寒天基礎(chǔ)MiddleBrook7H10AgarBaseβ淀粉樣肽β-Amyloid1-40/Aβ1-40C端抗體

    紫色小單孢菌(絳紅小單孢菌)槲皮素;QuercetinMiddleBrook7H11瓊脂基礎(chǔ)MiddleBrook7H11寒天基礎(chǔ)MiddleBrook7H11AgarBase血管生成素-1抗體

    嗜熱乳酸鏈球菌胡黃連苷Ⅱ;PicrosideⅡMiddlebrook7H9肉湯基礎(chǔ)Middlebrook7H9BrothBase血管生成素-2抗體

    孢小單孢菌絳紅變種胡黃連苷Ⅰ;PicrosideⅠMiddlebrookADC增菌液MiddlebrookADCEnrichment錨定蛋白G抗體

    紫色小單孢菌(絳紅小單孢菌)黃杞苷;EmgelitinMiddlebrookOADC增菌液MiddlebrookOADCEnrichment心鈉肽(心鈉素)抗體

    運動發(fā)酵單孢菌和厚樸酚;HonokiolLowenstein-Jensen培養(yǎng)基基礎(chǔ)Lowenstein-Jensen培地基礎(chǔ)Lowenstein-JensenMediumBase血管緊張素Ⅱ-2型受體抗體

    尿素八疊球菌厚樸酚;Magnolol酸性L-J培養(yǎng)基基礎(chǔ)酸性L-J培地基礎(chǔ)AcidL-JMediumBase膜粘連蛋白A1抗體

    亞黃八疊球菌胡蘿卜苷;EleutherosideA堿性L-J培養(yǎng)基基礎(chǔ)アルカリ性L-J培地基礎(chǔ)AlkalineL-JMediumBase膜粘連蛋白I抗體

    藤黃八疊球菌β-胡蘿卜素;β-Carotene雙抗巧克力瓊脂基礎(chǔ)BC寒天基礎(chǔ)Bi-AntiChocolateAgarBase膜粘連蛋白Ⅱ抗體
    95D細胞纖維母生長因子5抗原維生素B12(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse

    衰老關(guān)鍵蛋白抗原維生素B3(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse

    FosB抗原維生素B6(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

    FOS樣抗原2維生素C(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat

    叉頭蛋白F1抗原維生素C鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

    插頭蛋白J1抗原維生素K3,萘醌(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

    FoxP1(T轉(zhuǎn)錄因子)抗原萎銹靈(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

    插頭蛋白M1抗原肟菌酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat

    麻疹病抗原(麻疹病融合蛋白)烏拉地爾(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Rat
    注意事項:
         盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
         如果有細菌或真菌污染,會嚴(yán)重影響檢測效果。
         染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
         如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
         熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
         用于流式細胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
         需自備PBS。
         本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
         為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

     


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