HCM細胞

產品名稱：心肌細胞
英文簡稱：HCM細胞

貨號：LZ-X969777
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌；部分產品現(xiàn)貨，公司產品僅用于科研超低比價，產品貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。

凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產品于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
甲基原纖細薯蕷皂苷兔脾臟淋巴分離液試劑盒蛋白質西方雜交免疫印跡消除試劑盒

桑黃酮G；桑根酮C魚脾臟淋巴分離液試劑盒蛋白質轉印印跡膜麗春紅（Ponceau S）染色試劑盒

新莪術二酮小鼠臟器組織淋巴分離液試劑盒蛋白質轉印印跡膜萘酚藍黑（NBB）染色試劑盒

B1雞臟器組織巨噬分離液KIT蛋類L－乳酸比色法定量檢測試劑盒

B2兔外周血淋巴分離液試劑盒蛋類琥珀酸比色法定量檢測試劑盒

G1羊外周血淋巴分離液試劑盒蛋類羥丁酸比色法定量檢測試劑盒

G2牛外周血淋巴分離液試劑盒蛋類羥丁酸待測樣品處理試劑盒

地黃苷C雞外周血淋巴分離液試劑盒蛋類總乳酸比色法定量檢測試劑盒

地黃苦苷豬外周血淋巴分離液試劑盒稻麥α淀粉酶活性DNS比色法定量檢測試劑盒

細葉遠志苷B;遠志糖苷B魚(淡水)全血淋巴分離液試劑盒稻麥α淀粉酶活性EPS-G7酶偶聯(lián)比色法定量檢測試劑盒

ENT-16βH-貝殼杉烷-17,18-二羧酸雞外周血造血干分離液試劑盒稻麥類食物DNA分離試劑盒

豨薟酸牛血管內皮分離液試劑盒

稻麥類食物DNA分離試劑盒

ent-16α17-二羥基貝殼杉烷-18-羧酸大鼠骨髓干分離液

稻米類植酸比色法定量檢測試劑盒

ent-16a,17,19-三羥基貝殼杉烷-18-羧酸Hoechst 33258染色液（即用型）等電聚焦蛋白電泳（IEF）10倍祛色溶液

五味子酮Hoechst 33258染色液（即用型）等電聚焦蛋白電泳（IEF）10倍染色溶液
HCM細胞著絲粒蛋白C1抗體萘（標準品） Afatinib/BIBW2992

分裂周期相關蛋白萘丁美/萘普（標準品） Atazanavir sulfate

豬瘟病抗體萘夫西林鈉(標準品) Atazanavir sulfate

16號染色體開放閱讀框72抗體萘哌地爾（標準品） Imipenem and Cilastatin Sodium

補體C4 γ 鏈蛋白抗體萘普生（標準品） Vinpocetine

補體C4d-A蛋白抗體萘普生鈉（標準品） Phenytoin sodium

補體C4b-A蛋白抗體萘乙酰(標準品) Oxcarbazepine

磷化整合素β2/Integrin β2抗體尼泊金酯(標準品) Oxcarbazepine

磷化整合素β2/Integrin β2抗體尼泊金酯(標準品) Hypericin