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熒光-PCR法的主要理論依據(jù)說(shuō)明

熒光-PCR法是通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程。PCR擴(kuò)增時(shí)加入一對(duì)引物和一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，淬滅基團(tuán)抑制報(bào)告基團(tuán)的熒光發(fā)射。剛開(kāi)始時(shí)，探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上，PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)發(fā)生分離，抑制作用被解除，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)。隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物不斷累...

恩杜姆病毒PCR檢測(cè)試劑盒RNA質(zhì)量檢測(cè)

恩杜姆病毒PCR檢測(cè)試劑盒RNA質(zhì)量檢測(cè)：1）紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液濃度和純度。濃度測(cè)定A260下讀值為1表示40gRNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260×稀釋倍數(shù)×40g/ml。具體計(jì)算如下：RNA溶于40lDEPC水中，取5ul，1:100稀釋至495的TE中，測(cè)得A260=0.21RNA濃度=0.21×10...

敗血梭狀芽胞桿菌PCR檢測(cè)試劑盒液體類標(biāo)本收集

敗血梭狀芽胞桿菌PCR檢測(cè)試劑盒液體類標(biāo)本收集：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。1）血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。2）血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。3）尿液：用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3...

帕臘南病毒PCR檢測(cè)試劑盒反應(yīng)流程常規(guī)程序

帕臘南病毒PCR檢測(cè)試劑盒反應(yīng)流程常規(guī)程序：將PCR反應(yīng)所需的成分配置完后，在PCR儀上于94-96℃預(yù)加熱幾十秒至幾分鐘，使模板DNA充分變性，然后進(jìn)入擴(kuò)增循環(huán)。在每一個(gè)循環(huán)中，先于94℃保持30秒鐘使模板變性，然后將溫度降到復(fù)性溫度（一般50-60℃之間），一般保持30秒鐘，使引物與模板充分退火；在72℃保持1分鐘（擴(kuò)增1kb片段），使引物在模板上延伸，合成DNA，完成一個(gè)循環(huán)。重復(fù)這樣的循環(huán)25～35次，使擴(kuò)增的DNA段大量累積。在72℃保持3-7min，使產(chǎn)物延伸完整...

瑪爾摩分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

瑪爾摩分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitativereal-timePCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，...

蛙病毒PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)規(guī)則

蛙病毒PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)規(guī)則：1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過(guò)2%。可用水和電子天平進(jìn)行確定。但有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。4、實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使底物避光保存。5、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。6、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。7、將液...

LAMP試劑盒所體現(xiàn)的擴(kuò)增技術(shù)探討

LAMP試劑盒的性狀為盒裝液體，在運(yùn)輸方面一般為快遞運(yùn)輸，產(chǎn)品廣泛用于科研而不用于臨床。對(duì)于PCR方法來(lái)說(shuō)在人類及動(dòng)植物疾病基因診斷、食品分析和環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域發(fā)揮著舉足輕重的作用，其靈敏度高、特異性好，是目前準(zhǔn)確的基因診斷方法。然而PCR方法操作起來(lái)較復(fù)雜，對(duì)儀器和人員要求比較高，不適合基層或現(xiàn)場(chǎng)快速診斷，因此在國(guó)內(nèi)的推廣速度并不是很快。21世紀(jì)初日本學(xué)者公開(kāi)了一種新的基因診斷技術(shù)，即LAMP(Loop-mediatedisothermalamplification)，中文名...

馬爾太蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

馬爾太蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitativereal-timePCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*...