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    新城疫病毒RT-PCR檢測試劑盒說明書

    產(chǎn)品簡介

    細胞黏附分子CD112100 ul

    40S核糖體蛋白S19(RPS19)ELISA試劑盒Nestin 巢蛋白/神經(jīng)上皮干細胞蛋白20 ul

    Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)ELISA試劑盒Nestin 巢蛋白/神經(jīng)上皮干細胞蛋白

    更新時間:2021-03-13
    訪問次數(shù):668
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    注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

     產(chǎn)品名稱

     新城疫病毒RT-PCR檢測試劑盒說明書

     規(guī)格

     50T

     貨號

     LZP7843

    實驗過程:
    一、試劑準(zhǔn)備
    1. DNA模板
    2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
    3.10×PCR Buffer
    4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
    5.Taq酶
    二、操作步驟
    1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
    dNTP mixl                 4μl
    引物1(10pM)               2μl
    引物2(10PM)              2μl
    Taq酶(2U/μl)            1μl
    DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
    ddH2O至               50 μl
    PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
    2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
    3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
    4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
    三、注意事項
    1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
    2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
    3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
    4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
    5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
    6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
    7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
    一、 試劑的準(zhǔn)備
    從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
    設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
    試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
    熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
    酶混合物 1 µL N×1 µL
    總量 15 µL N×15µL
    1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
    7.2 qPCR反應(yīng)條件
    將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
    推薦循環(huán)條件:
    1循環(huán) 50℃ for 2 min
    預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
    PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
    組成及試劑配制:
    1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
    2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
    3、 樣品稀釋液:1×20ml。
    4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
    5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
    硬脂酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))BTAF1 Antibody六氫鄰二甲酰亞

    甜蜜素(標(biāo)準(zhǔn)品)VEGF Receptor 3 (C28G5) Rabbit mAb1,2,3,6-四氫鄰二甲酰亞

    L-山梨糖(標(biāo)準(zhǔn)品)Fibrillarin (C13C3) Rabbit mAb硒化鋁

    糖精鈉 水合物(標(biāo)準(zhǔn)品)Fibrillarin (C13C3) Rabbit mAb5-氟煙酸

    鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000µg/mL,基體:5%HCI)Phospho-PRAS40 (Thr246) Antibody氨基吡啶-2-羧酸

    鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,介質(zhì):1.0mol/L 硝酸)Phospho-EGF Receptor (Tyr998) (C24A5) Rabbit mAb氟-2,吲哚二酮

    銫標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:水)α-Synuclein Antibody2-吡咯甲

    鈰標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)Acetyl-Histone H4 (Lys16) (E2B8W) Rabbit mAb (PE Conjuga)六氟酸四銅

    標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.05000mol/L(0.1N))GLI1 (L42B10) Mouse mAb1,5-萘二磺酸

    標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:水)α/β-Synuclein (Syn205) Mouse mAb甲酸異酯

    鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L 硝酸)α/β-Synuclein (Syn205) Mouse mAb吡唑酸頻哪酯

    鈧標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基體:1.0mol/L HNO3)GATA-6 (D61E4) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)甲基四氫鄰二甲酸酐

    標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:二硫化碳)EGF Receptor (C74B9) Rabbit mAb硝基-1-萘

    標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.96mg/ml,溶劑:甲)α-Synuclein (Syn204) Mouse mAb溴化鈦

    鄰硝基標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)α-Synuclein (Syn204) Mouse mAbN-丁基咪唑

    間酚標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)Methyl-Histone H3 (Lys4) Antibody Sampler Kit氧化鏑

    2,5-二甲酚標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)VCP Antibody三化

    一二溴標(biāo)準(zhǔn)溶液(387±18μg/ml,溶劑:甲)VCP (7F3) Rabbit mAb3,3',4,4',5-五溴聯(lián)

    Ⅳ型前膠原氨基末端肽(PⅣNP)ELISA試劑盒MYOG/Myogenin  肌紅蛋白(肌細胞生成素)100 ul

    Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA試劑盒Nephrin  去氧腎上腺素20 ul

    4-羥基壬酸(HNE)ELISA試劑盒nectin 2/CD112  細胞黏附分子CD112100 ul

    40S核糖體蛋白S19(RPS19)ELISA試劑盒Nestin  巢蛋白/神經(jīng)上皮干細胞蛋白20 ul

    Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)ELISA試劑盒Nestin  巢蛋白/神經(jīng)上皮干細胞蛋白(大、)100 ul

    Ⅲ型前膠原氨基末端肽(PⅢNP)ELISA試劑盒Neurobeachin  蛋白激酶錨定蛋白100 ul

    Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA試劑盒AKAP95  蛋白激酶A錨定蛋白95100 ul

    Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒NeuN  神經(jīng)元核抗原100 ul

    Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)ELISA試劑盒Nrn1/Cpg15/Neuritin  轉(zhuǎn)化神經(jīng)突起蛋白20 ul
    新城疫病毒RT-PCR檢測試劑盒說明書豚鼠促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒英文名稱:guinea pig follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit進口/原裝

    豚鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒 英文名稱:Guinea Pig mocyte chemotactic protein 4,MCP-4 ELISA Kit 進口/原裝

    豚鼠端粒酶(TE)ELISA試劑盒 英文名稱:guinea pig omerase,TE ELISA Kit進口/分裝

    豚鼠肝細胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒英文名稱:guinea pig hepatocyte growth factor,HGF ELISA Kit *

    豚鼠鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA試劑盒英文名稱:Guinea pig Lebtospira IgG ELISA Kit*

    豚鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒 英文名稱:Guinea Pig lipid peroxlde,LPO ELISA Kit *小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒      組裝/原裝

    小鼠二磷酸腺苷(ADP)ELISA試劑盒      組裝/原裝

    小鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒      組裝/原裝

    小鼠兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒      組裝/原裝         

     

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