超氧陰離子清除能力測試盒(微量法)

公司產(chǎn)品僅供科研使用，下列是產(chǎn)品屬性：

商品介紹：

測定意義:

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，與機體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。

測定原理：

AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－與對氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，樣品對超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負相關(guān)。

自備實驗用品及儀器：

天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
注意事項：

①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作程序：

注意：最重要的是及時固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理，以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外，過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。

1．玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2．細胞在多聚賴氨酸處理的蓋玻片上進行培養(yǎng)，條件為37℃和5%的CO2，所用培養(yǎng)基為Dulbecco基礎(chǔ)培養(yǎng)基。細胞長好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。

3．培養(yǎng)細胞和冰凍切片均可用下述方法固定：固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌，干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。

4．30%H2O2 1份+純甲醇50份混合，室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。

5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型，混勻)，37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。

6.后固定：消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。

7．預(yù)雜交：濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體，不洗。

8．雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專用蓋玻片的保護膜揭開后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。

9．雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。

10.滴加封閉液：37℃30分鐘。甩去多余液體，不洗

11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

12.滴加SABC：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

13.滴加化過氧化物酶：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。

14.DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑Ａ，Ｂ，C各一滴，混勻，加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。

15.必要時蘇木素復(fù)染，充分水洗。

16.酒精脫水，二甲苯透明，封片。

IL2RG Protein Rat 重組大鼠 IL2RG / CD132 蛋白 (His 標簽)

ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.5mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39) 促腎上腺皮質(zhì)激素(18-39)(抗原)

BID重組小鼠 BID 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

IL2 Protein Human 重組人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

CABP5重組人 CABP3 / CABP5 蛋白 (His 標簽) Protein

FZD4重組大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 標簽) Protein

EGF(Epidermal growth factor 0.5mgEGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長因子抗原(大鼠)

ITGAX & ITGB2重組人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白 Protein

NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽)

ACVR2A Protein Mouse 重組小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 標簽)

EGF(Epidermal growth factor 0.5mgEGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長因子抗原(大鼠)

NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽)

FZD4重組大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 標簽) Protein

ACVR2A Protein Mouse 重組小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 標簽)

ITGAX & ITGB2重組人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白 Protein

FCGR1 Protein Mouse 重組小鼠 CD64 / FCGR1 蛋白 (His & AVI 標簽), Biotinylated

GLP-1/KG-31(Glucagon-like peptide-1 0.5mgGLP-1/KG-31(Glucagon-like peptide-1) peptide 胰高血糖素樣肽-1(多肽)

REG4重組大鼠 REG4 蛋白 (His 標簽) Protein

FCGR3A重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標簽) Protein

MSLN Protein Human 重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白 (Fc 標簽)
超氧陰離子清除能力測試盒(微量法)Guinea IgG/RBITC 羅丹明標記豚鼠IgG 0.3ml

Phospho-5-Lipoxygenase(Ser524) 英文名稱： 磷酸化5-脂氧合酶抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh DNPK1 DNA依賴蛋白激酶催化亞基抗體 規(guī)格 0.1ml

ACA-IgA(Mouse anti-cardiolipin antibody IgA) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂抗體IgAMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

微囊藻毒檢測試劑盒 96孔/盒 適用于水樣、藍藻、魚肉等樣品

Anti-CK5/FITC 熒光素標記細胞角蛋白5抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml