Lp-PLA2脂蛋白磷脂酶A2ELISA試劑盒

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

產(chǎn)品屬性：

檢測(cè)程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機(jī)

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α (sm Actinin-α )試劑盒1,3,5-三咖啡酰奎寧4-溴丁 98%苯偶酰 98%

橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α (sm Actinin-α )試劑盒1,3-二咖啡酰奎寧/洋薊素二聚環(huán)戊二烯 97%,Endo苯 Standard for GC，≥99.5%（GC)

骨成型蛋白7(BMP-7)試劑盒1,5-二咖啡酰奎寧二聚環(huán)戊二烯 98%,Endo + Exo苯 AR,>98.5%(GC)

骨成型蛋白7(BMP-7)試劑盒1,7-二羥-3,4-二氧山-7-O-葡萄糖二聚環(huán)戊二烯 97%,Exo苯 CP,>98%(GC)

25羥維D3(25(OH)D3/25 HVD3)試劑盒1,8-桉葉素橄欖油 CP苯 ACS

25羥維D3(25(OH)D3/25 HVD3)試劑盒1，8-二羥蒽醌橄欖油 藥用級(jí)，Ph Eur苯 >99.0% (GC)

白三烯B4(LTB4) 試劑盒10-姜酚亞磷三乙酯 98%苯 重蒸餾, ≥99.5%

白三烯B4(LTB4) 試劑盒10-羥癸烯二茂鐵 98%DL-苦杏仁 CP,98.5%

腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)試劑盒10-羥攀援山橙二茂鐵 99%苯乙 99%

腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)試劑盒10-羥聚（烯酯） SU CP，98.0%（劇品）

大鼠一氧化氮(NO)試劑盒10-羥喜樹聚苯乙烯(PS) 通用型II,高強(qiáng)度藍(lán)V AR

大鼠一氧化氮(NO)試劑盒10-去乙酰紫杉;7-表-去乙酰紫杉聚苯乙烯(PS) 通用型III,高強(qiáng)度、押出用、食品用喹啉黃 70%

氧化低密度脂蛋白(OxLDL)試劑盒 10-脫乙酰巴卡亭聚苯乙烯(PS) 耐沖擊型檸檬二氫 AR,98.0%

氧化低密度脂蛋白(OxLDL)試劑盒 11-O-羅漢果V聚苯乙烯(PS) 高光澤度級(jí)香草 AR，99%

骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)試劑盒11-羥柳杉酚聚苯乙烯(PS) 擠出級(jí)香草 ≥99%, FCC, FG

骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)試劑盒11-羰-Β-乙酰乳香聚苯乙烯(PS) 食品級(jí)天然香蘭素 Natural，≥99%, FCC, FG
Lp-PLA2脂蛋白磷脂酶A2ELISA試劑盒BCIP/NBT 堿性磷酯酶顯色試劑盒是一種用于免疫組化顯色、Western 等膜顯色和誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS 鑒定等的試劑盒。

BCIP/NBT 是堿性磷酯酶的常用底物。在堿性磷酯酶的催化下，BCIP 會(huì)被水解產(chǎn)生強(qiáng)反應(yīng)性的產(chǎn)物，該產(chǎn)物會(huì)和NBT 發(fā)生反應(yīng)，形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色的NBT-formazan。

本試劑盒可以用于細(xì)胞或組織的堿性磷酯酶顯色包括誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS 的鑒定，也可以用于Western 等結(jié)合有堿性磷酯酶的膜的顯色檢測(cè)。同時(shí)也可以用于細(xì)胞或組織內(nèi)源性的堿性磷酯酶顯色。

組份規(guī)格：

試劑A：堿性磷酯酶顯色緩沖液 100ml

試劑B：BCIP 溶液(300X) 350μl

試劑C：NBT 溶液(150X) 700μl

使用說明

1. 對(duì)于組織切片或細(xì)胞樣品或膜，在與堿性磷酯酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5 次，每次3-5 分鐘。對(duì)于檢測(cè)內(nèi)源性堿性磷酯酶的組織或細(xì)胞樣品，在適當(dāng)固定后，也用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5 次，每次3-5 分鐘。

2. 按照如下比例依次加入各溶液，混勻后即配制成BCIP/NBT 染色工作液，配方如下：試劑A：堿性磷酯酶顯色緩沖液 3mL試劑B：BCIP 溶液(300X) 10μL試劑C：NBT 溶液(150X) 20μL染色工作液總體積：3.03mL

3. 后一次洗滌完畢后，去除洗滌液，加入適量BCIP/NBT 染色工作液，確保能充分覆蓋樣品。

4. 室溫避光孵育5-30 分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可長(zhǎng)達(dá)24 小時(shí))，直至顯色至預(yù)期深淺。

5. 去除BCIP/NBT 染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2 次即可終止顯色反應(yīng)。

6. 對(duì)于組織切片或細(xì)胞樣品，顯色反應(yīng)終止后，如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色，以便于觀察。對(duì)于膜，顯色反應(yīng)終止后，可以室溫晾干避光保存。

儲(chǔ)存：4℃，有效期一年。